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介紹共焦顯微鏡的原理及成像技術(shù)

更新時(shí)間:2020-12-17      點(diǎn)擊次數(shù):1426
 從一個(gè)點(diǎn)光源發(fā)射的探測(cè)光通過(guò)透鏡聚焦到被觀測(cè)物體上,如果物體恰在焦點(diǎn)上,那么反射光通過(guò)原透鏡應(yīng)當(dāng)匯聚回到光源,這就是所謂的共聚焦,簡(jiǎn)稱共焦。其意義是:通過(guò)移動(dòng)透鏡系統(tǒng)可以對(duì)一個(gè)半透明的物體進(jìn)行三維掃描。共聚焦顯微鏡能提供無(wú)比準(zhǔn)確的三維成像,以及對(duì)亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和動(dòng)力學(xué)過(guò)程的準(zhǔn)確測(cè)試。
  共焦顯微鏡在反射光的光路上加上了一塊半反半透鏡,將已經(jīng)通過(guò)透鏡的反射光折向其它方向,在其焦點(diǎn)上有一個(gè)帶有針孔的擋板,小孔就位于焦點(diǎn)處,擋板后面是一個(gè)光電倍增管??梢韵胂?,探測(cè)光焦點(diǎn)前后的反射光通過(guò)這一套共焦系統(tǒng),必不能聚焦到小孔上,會(huì)被擋板擋住。于是光度計(jì)測(cè)量的就是焦點(diǎn)處的反射光強(qiáng)度。
  傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡使用的是場(chǎng)光源,標(biāo)本上每一點(diǎn)的圖像都會(huì)受到鄰近點(diǎn)的衍射或散射光的干擾;激光掃描共聚焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點(diǎn)光源對(duì)標(biāo)本內(nèi)焦平面的每一點(diǎn)掃描,標(biāo)本上的被照射點(diǎn),在探測(cè)針孔處成像,由探測(cè)針孔后的光電倍增管(PMT)或冷電耦器件(cCCD)逐點(diǎn)或逐線接收,迅速在計(jì)算機(jī)監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖像。照明針孔與探測(cè)針孔相對(duì)于物鏡焦平面是共軛的,焦平面上的點(diǎn)同時(shí)聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔,焦平面以外的點(diǎn)不會(huì)在探測(cè)針孔處成像,這樣得到的共聚焦圖像是標(biāo)本的光學(xué)橫斷面,克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點(diǎn)。
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