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介紹共焦顯微鏡的原理及成像技術(shù)

更新時間:2020-12-17      點擊次數(shù):1487
 從一個點光源發(fā)射的探測光通過透鏡聚焦到被觀測物體上,如果物體恰在焦點上,那么反射光通過原透鏡應(yīng)當(dāng)匯聚回到光源,這就是所謂的共聚焦,簡稱共焦。其意義是:通過移動透鏡系統(tǒng)可以對一個半透明的物體進(jìn)行三維掃描。共聚焦顯微鏡能提供無比準(zhǔn)確的三維成像,以及對亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和動力學(xué)過程的準(zhǔn)確測試。
  共焦顯微鏡在反射光的光路上加上了一塊半反半透鏡,將已經(jīng)通過透鏡的反射光折向其它方向,在其焦點上有一個帶有針孔的擋板,小孔就位于焦點處,擋板后面是一個光電倍增管。可以想像,探測光焦點前后的反射光通過這一套共焦系統(tǒng),必不能聚焦到小孔上,會被擋板擋住。于是光度計測量的就是焦點處的反射光強度。
  傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡使用的是場光源,標(biāo)本上每一點的圖像都會受到鄰近點的衍射或散射光的干擾;激光掃描共聚焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點光源對標(biāo)本內(nèi)焦平面的每一點掃描,標(biāo)本上的被照射點,在探測針孔處成像,由探測針孔后的光電倍增管(PMT)或冷電耦器件(cCCD)逐點或逐線接收,迅速在計算機監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖像。照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的,焦平面上的點同時聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔,焦平面以外的點不會在探測針孔處成像,這樣得到的共聚焦圖像是標(biāo)本的光學(xué)橫斷面,克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點。
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