MicaCam是生命科學(xué)研究人員聚在一起互動和探討生命科學(xué)的地方。分享您的問題并參與直播。
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第2集MicaCam的內(nèi)容是結(jié)合寬場和共聚焦成像來研究斑馬魚胚胎(Danio rerio)的早期發(fā)育階段,即從卵細(xì)胞到多細(xì)胞階段。
學(xué)習(xí)要點(diǎn)
· 如何創(chuàng)建一個(gè)樣品的大圖預(yù)覽,然后選擇方向和表達(dá)水平正確的胚胎進(jìn)行進(jìn)一步成像
· 如何利用MICA的環(huán)境控制功能,在穩(wěn)定的條件下進(jìn)行延時(shí)拍攝
· 如何在一場實(shí)驗(yàn)中結(jié)合使用溫和的寬場成像和高分辨率的共聚焦成像
演講人
Oliver Schlicker博士
Oliver Schlicker博士,高級應(yīng)用經(jīng)理——徠卡顯微系統(tǒng)
Oliver擁有德國海德堡大學(xué)的神經(jīng)細(xì)胞生物學(xué)博士學(xué)辭掉德國斯圖加特IZI的Imaging Facility的管理工作后,他于2008年加入徠卡顯微系統(tǒng)韋茨拉爾公司,擔(dān)任應(yīng)用經(jīng)理,負(fù)責(zé)研究熒光寬場顯微鏡。
Camilla Autorino博士生
Camilla Autorino,博士生——Petridou研究組,EMBL海德堡
Camilla研究斑馬魚的早期胚胎發(fā)育階段,關(guān)注于組織和細(xì)胞層面。她來自意大利,在羅馬的'La Sapienza'大學(xué)獲得了生物學(xué)學(xué)士學(xué)位,然后她來到了德國,在海德堡大學(xué)攻讀發(fā)育和干細(xì)胞生物學(xué)的碩士學(xué)位。
觀看實(shí)驗(yàn)
MicaCam第02集——原定播出日期:2022年4月6日
我們的嘉賓Camilla Autorino向我們介紹了她的工作:研究斑馬魚的早期發(fā)育階段。更具體地說,她的工作重點(diǎn)是分析張力等組織屬性的變化會對胚胎的整體發(fā)育產(chǎn)生哪些影響。在這一集的MicaCam中,她展示了一個(gè)應(yīng)用工作流程:從胚胎樣品的大視野預(yù)覽到選擇表達(dá)水平正確的胚胎,先在寬場下進(jìn)行活細(xì)胞成像,然后在高分辨率下進(jìn)行共聚焦成像。
該應(yīng)用展現(xiàn)了MICA環(huán)境控制的穩(wěn)定性,以及如何在單一培養(yǎng)皿中培養(yǎng)數(shù)個(gè)處于不同發(fā)育階段的胚胎。斑馬魚胚胎的溫度必須穩(wěn)定在28°C;如果溫度升高或降低,它們的培養(yǎng)速度將加快或減緩,呈現(xiàn)出不同的動態(tài)變化。因此,穩(wěn)定控制溫度和濕度對這類應(yīng)用很重要。
此外,由于在兩個(gè)熒光標(biāo)記同時(shí)表達(dá)的情況下,胚胎的識別度將大大提高,因此選擇方向和表達(dá)水平優(yōu)異的胚胎,以供后期成像的步驟將變得更加輕松。我們的嘉賓還展示了用MICA從寬場成像切換到共聚焦成像的便捷體驗(yàn),與傳統(tǒng)顯微鏡相比,她無需過多操作,即可利用自動成像功能獲得所有必要的數(shù)據(jù)集。
圖1:圖片說明:發(fā)育中的斑馬魚(Danio rerio)胚胎從球體階段到體節(jié)期的延時(shí)短片。圖像中的魚系是一個(gè)中胚層命運(yùn)報(bào)告的轉(zhuǎn)基因魚系(Tbxta:GFP),在綠色通道中可見。細(xì)胞間的液體(或細(xì)胞間的空間)用Dextran與Alexa 647耦合標(biāo)記,在紅色通道中可見。由德國海德堡EMBL Petridou研究組的Camilla Autorino提供。
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