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介紹徠卡熒光顯微鏡的燈泡調(diào)中和熒光觀察

更新時(shí)間:2023-09-04      點(diǎn)擊次數(shù):837
     徠卡熒光顯微鏡是由生物顯微鏡和落射熒光裝置組成,廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)、材料科學(xué)等領(lǐng)域。配有消雜散光系統(tǒng),將強(qiáng)烈的雜光導(dǎo)入至物鏡光路之外,并加以吸收,大大提高了徠卡熒光顯微鏡的圖像信噪比。
    一、燈泡調(diào)中:
    (1)任選一塊標(biāo)本放在載物臺(tái)上;
    (2)轉(zhuǎn)動(dòng)鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移出光路,轉(zhuǎn)動(dòng)濾色片組轉(zhuǎn)換手輪,將紫光(V)或藍(lán)光(B)或綠光(G)激發(fā)濾色片組轉(zhuǎn)入光路,并將10X熒光物鏡轉(zhuǎn)入光路;
    (3)調(diào)節(jié)粗微調(diào)手輪,將標(biāo)本像調(diào)焦清晰;
    (4)前后推動(dòng)垂直照明器右邊的聚光鏡調(diào)焦推桿,使視場(chǎng)光欄成像清晰,轉(zhuǎn)動(dòng)視場(chǎng)光欄撥桿將視場(chǎng)光欄收小,調(diào)節(jié)視場(chǎng)光欄調(diào)中螺釘使視場(chǎng)光欄居中,然后再將視場(chǎng)光欄開至較大;
    (5)轉(zhuǎn)動(dòng)鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移入光路,前后調(diào)節(jié)燈箱上的聚光鏡撥桿,使汞燈的弧光在視場(chǎng)內(nèi)成像清晰;
    (6)調(diào)整燈箱上的燈泡水平調(diào)節(jié)螺釘和垂直調(diào)節(jié)螺釘,使汞燈的弧光居中;
    (7)調(diào)整反光鏡水平調(diào)節(jié)螺釘和垂直調(diào)節(jié)螺釘,使光源的反射像與汞燈的弧光分開;
    (8)轉(zhuǎn)動(dòng)聚光鏡旋鈕把聚光鏡移出光路,此時(shí)視場(chǎng)照明均勻。

 

 
    二、熒光觀察:
    (1)將熒光染色標(biāo)本放到載物臺(tái)上。
    (2)將10X平場(chǎng)物鏡或40X熒光物鏡轉(zhuǎn)入光路,調(diào)節(jié)載物臺(tái)縱橫移動(dòng)手輪,將標(biāo)本移入光路。
    (3)轉(zhuǎn)動(dòng)濾光片轉(zhuǎn)換撥輪,將熒光染色標(biāo)本所需要的激發(fā)濾光片組轉(zhuǎn)入光路。激發(fā)濾光片組編號(hào)刻在濾片組轉(zhuǎn)換撥輪上。濾光片選擇正確與否,是徠卡熒光顯微鏡能否得到正確應(yīng)用的關(guān)鍵。選用濾光片時(shí),必須遵守斯托克斯定律:激發(fā)濾光片的透射波長(zhǎng)<雙色束分離器的透射波長(zhǎng)<阻斷濾光片的透射波長(zhǎng)。由于激發(fā)濾光片、雙色束分離器和阻斷濾光片,出廠時(shí)已按其用途和本身的光學(xué)特性進(jìn)行了嚴(yán)格的組合匹配,在觀察和攝影時(shí),只需選擇濾光片組即可。
    (4)調(diào)節(jié)粗調(diào)手輪,當(dāng)看清熒光圖像輪廓后,再用微調(diào)手輪調(diào)焦,直至看到清晰的熒光圖像。
    (5)當(dāng)需要得到較強(qiáng)的熒光圖像時(shí),可轉(zhuǎn)動(dòng)聚光鏡旋鈕把聚光鏡移入光路,可獲得較明亮的熒光圖像。
    (6)當(dāng)需要使用40X或100X熒光物鏡觀察時(shí),應(yīng)在標(biāo)本和物鏡間加上甘油,油中不能有影響觀察的小泡或雜質(zhì)。使用時(shí)可使甘油慢慢浸潤(rùn)一會(huì)兒,然后輕輕左右來回轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器以排除氣泡。
     徠卡熒光顯微鏡對(duì)于物質(zhì)的檢出能力是非常高的,具有放大的作用;而且對(duì)于被檢測(cè)物質(zhì)的細(xì)胞的刺激也是非常小的,可以檢測(cè)活體的染色體;還有就是可以進(jìn)行多個(gè)步驟的染色。對(duì)于熒光素的構(gòu)造觀察是非常好的,一般的顯微鏡是看不出來的。而且對(duì)于一些物質(zhì)是否有熒光,熒光是什么色調(diào)的進(jìn)行判斷,還能看出是不是抗體的熒光。此款顯微鏡對(duì)于物體的定性、定量分析都是可以測(cè)定的。
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