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說說熒光顯微鏡的成像技術(shù)

更新時間:2020-03-13      點擊次數(shù):891
  熒光顯微鏡用于研究細胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運輸、化學物質(zhì)的分布及定位等。細胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進行定性和定量研究的工具之一。
  熒光顯微鏡技術(shù)包括免疫熒光技術(shù)和熒光素直接標記技術(shù)。例如,將標記熒光素的純化肌動蛋白顯微注射入培養(yǎng)細胞中,可以看到肌動蛋白分子組裝成肌動蛋白纖維??蓪a(chǎn)生熒光的綠色熒光蛋白基因與某種蛋白質(zhì)基因融合,在表達這種融合蛋白的細胞中,便可直接在活體狀態(tài)下觀察到該蛋白在活細胞內(nèi)的動態(tài)變化。不同熒光素的激發(fā)波長范圍不同,所以同一樣品可以用兩種以上的熒光素標記,同時顯示不同成分在細胞中的定位。
  還有一種反卷積處理技術(shù),是一種應用于沿光學(Z)軸獲取的一組全聚焦圖像的算法,以增強對于給定圖像平面或多個焦平面圖像疊加中的光子信號。顯微鏡必須配備高精度的電動聚焦驅(qū)動器,以保證在樣品的焦平面之間以精確定義的間隔進行圖像采集。在一個典型的應用中,反卷積處理被用于去模糊以及從*焦平面上去除使用寬場熒光激發(fā)和發(fā)射聚焦外的光。反卷積過程是將焦平面上方和下方發(fā)射的光子產(chǎn)生的“模糊”強度重新分配給原始平面。因此,反卷積幾乎使用了所有可用的發(fā)射強度,并提供了較佳的光預算,從而使這項技術(shù)成為非常光敏的樣品的選擇方法。
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