2020年6月19日，激光共聚焦新品STELLARIS上市（上海站）暨華東區(qū)用戶交流會在中國科學(xué)院上海學(xué)術(shù)交流中心隆重召開。在眾多方法學(xué)并存的今天，以影像科學(xué)為基礎(chǔ)的科學(xué)研究迸發(fā)出蓬勃生機(jī)。本次會議圍繞顯微技術(shù)在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、植物學(xué)等多學(xué)科中的應(yīng)用成果展開討論，并實操體驗STELLARIS和THUNDER系列產(chǎn)品在諸多研究領(lǐng)域的應(yīng)用。

開幕式上，生命科學(xué)市場經(jīng)理李偉晶對各位專家的蒞臨表示了歡迎，回顧歷史，徠卡始終秉持以前沿科技為導(dǎo)向，實現(xiàn)應(yīng)用轉(zhuǎn)化，以助力用戶推動科學(xué)發(fā)展。應(yīng)用團(tuán)隊為STELLARIS揭開神秘面紗，向與會的專家們介紹了產(chǎn)品的性能與應(yīng)用，并通過分組操作的方式讓專家們親身感受革命性升級帶來的全新體驗。

▲應(yīng)用團(tuán)隊為STELLARIS揭幕

▲與會人員上機(jī)感受STELLARIS

會上諸多徠卡的資深用戶分享了自己的研究成果與心得體會，我們一起來回顧下吧。

講題一：血腦屏障胞轉(zhuǎn)機(jī)制管狀結(jié)構(gòu)的超分辨研究

報告人：田肖和 安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院

田教授介紹了課題組通過熒光納米探針揭示血腦屏障胞轉(zhuǎn)機(jī)制。從納米顆粒的制備到表面修飾分子Angiopep2濃度的優(yōu)化，從生物物理學(xué)模型分析到“三明治樣”3D細(xì)胞模型的設(shè)計，每一個環(huán)節(jié)都建立在穩(wěn)定的實驗平臺基礎(chǔ)上。研究人員發(fā)現(xiàn)大分子透過血腦屏障的轉(zhuǎn)運受到受體濃度的調(diào)節(jié)，且需Syndepin II的協(xié)助才能高效完成。田教授利用Leica共聚焦的共振掃描技術(shù)初步驗證了這一假說，利用4D STED技術(shù)進(jìn)一步捕捉到分子通過血腦屏障的實時超分辨影像學(xué)信息，并分享了他在STED熒光染料優(yōu)化環(huán)節(jié)上的寶貴經(jīng)驗，向我們展示了高水平的神經(jīng)生物學(xué)和納米示蹤技術(shù)的超分辨研究。

▲田教授分享其在STED熒光染料優(yōu)化環(huán)節(jié)上的寶貴經(jīng)驗

講題二：體外細(xì)胞微環(huán)境重構(gòu)及生物學(xué)行為研究

報告人：劉妍君 復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院

劉教授課題組結(jié)合微流控技術(shù)及分析化學(xué)的方法，重構(gòu)體內(nèi)細(xì)胞微環(huán)境，研究細(xì)胞運動、遷移等生命現(xiàn)象。通過與Leica合作共同搭建的全自動活細(xì)胞動態(tài)跟蹤影像平臺，實驗者可輕松追蹤長達(dá)數(shù)天的活細(xì)胞行為，并能保證長時間成像過程中焦面的穩(wěn)定及細(xì)胞的活性。研究者發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在體外重構(gòu)的不同微環(huán)境中可在EMT與Amoeba運動間靈活切換，這為體內(nèi)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移及侵襲機(jī)制的研究提供了新思路，有望為腫瘤精準(zhǔn)治療提供新方向。

▲劉教授分享其實驗平臺

講題三：FLIM在無標(biāo)記癌癥診斷和納米材料中的應(yīng)用

報告人：糜蘭 復(fù)旦大學(xué)光科學(xué)與工程系

FLIM技術(shù)具有對微環(huán)境的PH值、蛋白結(jié)合態(tài)、氧、鈣離子濃度等敏感，不受樣品濃度、激發(fā)光強(qiáng)度、光漂白等的影響等特點。研究人員發(fā)現(xiàn)由于代謝的不同，癌變區(qū)域的自發(fā)熒光壽命比較短。在常規(guī)腫瘤病理診斷中組織化學(xué)石蠟切片需要7天，冰凍切片HE染色需要30min，而FLIM方法只需要2~3min。在對肺癌與宮頸癌患者的樣本分析中發(fā)現(xiàn)，熒光壽命的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，且能在組織發(fā)生可觀測形變前對腫瘤進(jìn)行早期診斷。

▲FLIM成像下，腫瘤組織的自發(fā)熒光壽命短于正常組織，正常組織、移行區(qū)和癌變區(qū)的邊界明顯

此外，FLIM還可用于細(xì)胞內(nèi)PH探測。細(xì)胞內(nèi)pH對細(xì)胞增殖、凋亡、離子轉(zhuǎn)運、內(nèi)吞、腫瘤生長等至關(guān)重要，異常的pH與腫瘤、阿爾茨海默癥等相關(guān)。pH傳感CDs納米粒子，在不同PH值溶液中，不僅熒光亮度變化，熒光壽命也會變化，而且更加線性，更加穩(wěn)定。能應(yīng)用在活細(xì)胞中，與其他熒光染料共染。

▲CDs在活細(xì)胞中的FLIM成像

講題四：FLIM-FRET技術(shù)驗證植物自噬相關(guān)蛋白互作

報告人：管彬 中科院分子植物創(chuàng)新中心

煙草表皮細(xì)胞中瞬時表達(dá)細(xì)胞自噬相關(guān)膜蛋白X-GFP和Y-mCherry，研究人員利用門控技術(shù)有效去除煙草細(xì)胞壁的自發(fā)熒光和雜散光。在只表達(dá)X-GFP和表達(dá)free-GFP/Y-mCherry的對照組中測得Donor GFP的的熒光壽命為2.75ns左右，而在同時表達(dá)X-GFP和Y-mCherry的實驗組中測得GFP的熒光壽命下降至2.6ns左右，統(tǒng)計學(xué)分析顯示X蛋白與Y蛋白有顯著的FRET現(xiàn)象。

講題五：多功能熒光聚合物納米探針用于淋巴管系統(tǒng)結(jié)構(gòu)與功能的多尺度多模態(tài)成像

報告人：熊麗琴 上海交通大學(xué)

淋巴管與腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移息息相關(guān)，但目前對其生理過程研究較少。熊教授構(gòu)建了性能穩(wěn)定、更快速的淋巴管靶向顯影及載藥的多功能納米探針，標(biāo)記小鼠淋巴系統(tǒng)，再利用Leica多光子、高分辨、大深度成像系統(tǒng)觀察，發(fā)展了淋巴管系統(tǒng)活體高分辨成像的新方法。該方法實現(xiàn)了術(shù)中快速成像，準(zhǔn)確定位，區(qū)別正常淋巴結(jié)與腫瘤浸潤淋巴結(jié)的位置，幫助醫(yī)生精準(zhǔn)手術(shù)切除，而無需淋巴結(jié)清掃，減少手術(shù)并發(fā)癥，提高患者生活質(zhì)量。

▲熊老師為大家?guī)砭蕡蟾?/span>

講題六：STED揭示了纖毛中央微管的形成機(jī)制

報告人：劉浩 中國科學(xué)院分子細(xì)胞科學(xué)創(chuàng)新中心

纖毛的運動對很多器官正常生理功能起重要作用，而中央微管是纖毛運動的重要組成部分。研究發(fā)現(xiàn)Wdr47蛋白表達(dá)會隨著纖毛生長而遞增，同時Wdr47蛋白會在肺和腦等多纖毛組織器官中高表達(dá)。為了研究Wdr47蛋白在纖毛中扮演的角色，使用Leica STED超高分辨成像技術(shù)觀察Wdr47蛋白在纖毛中的定位。結(jié)果顯示，STED技術(shù)可以有效分辨Wdr47在微管上的定位情況，同時，Wdr47與中央微管有很好的共定位。

此次會議內(nèi)容精彩紛呈，氣氛熱烈活潑，與會人員收獲滿滿，一天的會議時長尤嫌不足。期待疫情早日結(jié)束，下一站的會議可以與更多老師相聚，為大家?guī)砀嗟那把胤窒怼?/span>