德國徠卡 共聚焦顯微鏡 STELLARIS 8 DIVE 光譜式多光子顯微鏡

多色多光子顯微鏡讓您更接近真像

多個不同熒光標記的組合越來越多地用于研究細胞和分子之間的動態(tài)相互作用和空間關系。 目的是理解各種各樣復雜的生物事件，例如細胞連通性、細胞表型檢測、蛋白質(zhì) 相互作用或者蛋白共表達和共定位。 要將這類研究擴大到整個器官或組織，需要合適的大體積多色顯微鏡學方法。 現(xiàn)在，DIVE 和 STELLARIS 相結合，為您提供靈活的多色多光子成像的強大性能。 而且，您還可以通過額外的無標記成像功能擴展實驗的潛力。

德國徠卡 共聚焦顯微鏡 STELLARIS 8 DIVE 光譜式多光子顯微鏡可無縫集成到共聚焦軟件界面中，提供快速且出色的導航功能 ，可輕松研究復雜樣本中的動態(tài)過程。STELLARIS 8 DIVE——為您的研究提供各種可能性。

強大的在體分析能力，較之前提供更多細節(jié)

STELLARIS 8 DIVE 可為您提供深度超過 1 毫米的靈活多色成像。 使用 4Tune 光譜可調(diào)非退掃描檢測器，最多可同時定義四個檢測波段，或者在發(fā)射光譜中的任何區(qū)域先后成像時獲得無限數(shù)量的熒光團。 您可以根據(jù)所需的熒光團組合進行靈活調(diào)節(jié)。 使用 STELLARIS 8 DIVE ，您可以通過超過 10 億個熒光團組合進行多光子實驗，您能夠更詳細地研究復雜的過程，例如神經(jīng)元連通性、器官結構、動態(tài)相互作用或者細胞和蛋白質(zhì)的空間關系。

利用 STELLARIS 8 DIVE，您可以通過四種或更多顏色研究活體樣本中的細胞轉移、區(qū)分相關蛋白、觀察清醒小鼠的海馬體活動或者固定的厚腸切片的結構！

傳統(tǒng)的二向色鏡一直無法最佳區(qū)分所有熒光團，但是現(xiàn)在利用光譜探測器可以輕松地實現(xiàn)這一點，因為我們可以真正做到為每個熒光團優(yōu)化您要探測的波長。

荷蘭癌癥研究所（荷蘭阿姆斯特丹） Jacco van Rheenen 教授/博士。

活小鼠大腦皮層的神經(jīng)元（GFP，綠色）和小膠質(zhì)細胞（YFP，黃色）帶有遺傳標記，星形膠質(zhì)細胞通過磺酰羅丹明（藍色）標記，在尾靜脈中注射 Alexa680-Dextran 將血管染色（紅色）。 整體約 250 x 250 x 250 µm。 樣本由德國神經(jīng)退行性疾病研究中心光學顯微鏡設備部門（德國波恩）提供。

輕松使用 DIVE——4Tune 檢測器

 4Tune 非退掃描檢測系統(tǒng) 可以配備 2 至 4 個檢測器，并且可自由配置混合檢測器 (Power HyD NDD)、光電倍增管 (PMT) 或將兩者結合使用。 發(fā)射光通過可變二向色鏡和帶通濾波器的組合方法分離。 在整個可見光光譜（380 - 800 納米）范圍內(nèi)自由調(diào)節(jié)您的檢測范圍！

使用 4Tune 用戶界面，可以通過簡單的拖放操作來優(yōu)化多個轉基因標志物的發(fā)射光設置。 用戶界面設計清晰直觀，操作非常簡單，幾乎無需培訓。

使用 STELLARIS 8 DIVE，您能夠為任何現(xiàn)有的和新開發(fā)的轉基因標志物做好準備，而且可以適應未來的新發(fā)展！

上圖： 4Tune 非退掃描檢測系統(tǒng)： 1) 可變二向色鏡 (VD)。 2) 可變帶通 (VB)。 3) Power HyD NDD 或 PMT。 下圖： 直觀的 4Tune 用戶界面，可輕松設置 380 至 800 納米的所有顏色的檢測窗口。

深入探索新維度

使用 STELLARIS 8 DIVE，您能夠靈活調(diào)節(jié)實現(xiàn)更深層更細微觀察。 使用新型可變光路擴束鏡 (VBE)，您可針對任何物鏡對所有激發(fā)光束進行獨立優(yōu)化調(diào)節(jié)。

VBE 能夠根據(jù)您的研究問題優(yōu)化共定位，并實現(xiàn)分辨率和深度之間的良好平衡。

小鼠大腦皮層，Thy1-eYFP。 使用“深度優(yōu)先"設置將穿透深度增加 20%。 IRAPO 25x1.0 W motCorr. 樣本由德國神經(jīng)退行性疾病研究中心光學顯微鏡設備部門（德國波恩）Kevin Keppler 提供。

使用可變光路擴束鏡優(yōu)化深度和分辨率

徠卡可變光路擴束鏡 (VBE) 將可調(diào)光束直徑與可調(diào)發(fā)散度相結合。 為您提供可調(diào)深度、分辨率和全色校正。

可調(diào)光束直徑可實現(xiàn)分辨率與深度之間的平衡優(yōu)化

STELLARIS 8 DIVE 能夠根據(jù)您的樣本要求進行調(diào)節(jié)。 使用可變擴束鏡，您可以選擇： 優(yōu)化分辨率——光束充滿物鏡后孔徑，以及優(yōu)化穿透深度——光束直徑稍稍小于物鏡后孔徑。 后孔徑未充滿會使焦點體積增大、光程縮短，從而增大有效激發(fā)。

可調(diào)光束發(fā)散可實現(xiàn)全色校正

我們的 IR APO 物鏡在紅外波段上不會出現(xiàn)色差。 配備 STELLARIS 8 DIVE，您就可以使用適合紅外線以及多條紅外激光線的物鏡： 可變光路擴束鏡可用于校正色差，完成更實用的多色實驗。

可調(diào)式可變光路擴束鏡 (VBE)

通過無標記成像功能擴展體內(nèi)深度實驗的潛力

膠原蛋白和彈性蛋白等分子在癌癥等疾病中起到相關作用。 我們的 4 tune 檢測器可使用二次和三次諧波產(chǎn)生信號，無需染色即可研究這些重要結構。

DIVE 與 STELLARIS 相結合，還可使用熒光固有的壽命信息。 借助這種能力，您可以通過 NADH 或 FAD 的壽命成像進行實驗，例如進行樣本代謝繪圖。

五彩斑斕的小鼠小腸：膠原蛋白 1 顯示為灰色（無標記 SHG），譜系追蹤干細胞顯示為青色、綠色、黃色和紅色。干細胞在生物體內(nèi)癌癥的傳播中發(fā)揮著重要作用。樣品由荷蘭癌癥研究所的 Jacco van Rheenen 提供。

輕松在組織中導航，無需額外染色

在組織中導航通常需要使用導向標志來了解感興趣區(qū)域的位置。 膠原蛋白的支架特性有助于在組織中導航并找到感興趣區(qū)域，且無需復染。

大多數(shù)生物組織含有膠原蛋白，它是結締組織的主要成分。 例如，腸被一層膠原蛋白包裹。 通過精確采集 ? 激發(fā)波長的發(fā)射信號，可以在多光子顯微鏡下輕松觀察膠原蛋白。 通過 4Tune 靈活的檢測窗口，可使用任何波長采集這類信號，無需額外的標記或工作。

一旦顯微鏡學家找到膠原蛋白結構，她就知道她感興趣的組織（這里是腸道干細胞）在附近了。
五彩斑斕的小鼠小腸：來自 SHG，灰色表示膠原蛋白 1，青色、綠色、黃色和紅色譜系示蹤干細胞。樣品由荷蘭癌癥研究所的 Jacco van Rheenen 提供。

將多光子成像和熒光壽命信息相結合，研究代謝變化

代謝變化可能是組織健康的重要標記。

STELLARIS 8 DIVE 可提供 TauSense 的所有優(yōu)勢，后者是一套基于熒光壽命的成像工具。 當細胞的代謝狀態(tài)發(fā)生變化時，可通過 NADH 等分子的熒光壽命變化來顯現(xiàn)出來。 NADH 在糖的新陳代謝中起到主要作用，其熒光壽命取決于葡萄糖濃度。 在引起葡萄糖分解的生物化學反應中會發(fā)生構象變化，這種變化會改變 NADH 熒光壽命。

STELLARIS 8 DIVE 可與 FAst Lifetime COntrast（FALCON）結合使用，進行全定量熒光壽命分析。

被培養(yǎng)的 HeLa 細胞用葡萄糖處理前后的 NADH 自體熒光。 左：使用 TauContrast 的定性結果。 右：使用 FALCON 中的相量圖進行的定量分析。

為多光子實驗增加額外維度

自發(fā)熒光是組織中內(nèi)源性熒光團（例如 NADH 或 FAD 等小分子或組織結構）發(fā)射的自然熒光。 它在樣本成像時經(jīng)常會導致問題。 但是，如果您能發(fā)揮它的優(yōu)勢呢？

現(xiàn)在，將 DIVE 和 TauSense 相結合，可以通過壽命信息進行分離，從自發(fā)熒光信號中獲得有價值的信息。 這一功能為您提供了一個額外的渠道，從而能夠從寶貴的樣本中獲得更多信息。

使用 RapidClear 透明化處理的腎臟切片并使用多光子激發(fā)成像。第一個圖像是強度圖像，第二個是 TauContrast（850 nm 激發(fā)），第三個來自四個光譜通道，其中紅色表示血管（AF488，920 nm 激發(fā)）、灰色表示膠原蛋白 (SHG)、綠色表示神經(jīng)細胞（SytoxOrange，1040 nm 激發(fā)）和藍色表示色核（AF633，1100 nm 激發(fā)）。由 SunJin 實驗室提供。

STELLARIS 的軟件功能提高工作效率

多光子系統(tǒng)通常使用嚴格，需要根據(jù)每個實驗和用戶進行調(diào)整。 此外還有使用活體動物或新移植組織工作的壓力，您很快就會了解進行多光子實驗時功能靈活性帶來的優(yōu)勢。 STELLARIS 軟件中無縫集成了多光子功能，STELLARIS 8 DIVE 可為您提供涵蓋從實驗設置到最終結果的輕松、無憂的工作流程。

使用 ImageCompass 順利設置實驗

使用 LAS X Navigator 在樣本上找到感興趣區(qū)域的直觀方法

通過動態(tài)信號增強提高速度和分辨率

直徑 3.5 mm 的腸道切片，用 RapidClear 透明化并用 Navigator 成像：黑白：SHG – 膠原蛋白；藍色：Sytox Orange – 細胞核；綠色：Alexa 633 – 神經(jīng)細胞；紅色：Alexa 488 – 血管。由 SunJin 實驗室提供。

使用 ImageCompass 輕松快速設置多色多光子成像實驗

STELLARIS 8 DIVE 多光子硬件集成到 STELLARIS 的 ImageCompass 界面中，您可以輕松定義實驗設置，以便快速啟動。

系統(tǒng)可利用范圍廣泛的熒光團數(shù)據(jù)庫自動定義 MP 激發(fā)和發(fā)射。 您也可以點擊幾下鼠標進行手動定義。 按序設置以及快速預覽和 3D 查看器——多色多光子成像從未如此簡單。

ImageCompass 可以控制 STELLARIS 8 DIVE 的硬件，并允許輕松定義實驗設置。

即時觀察重要細節(jié)，同時始終進行樣本概覽

LAS X Navigator 是功能強大的導航工具，可讓您從逐個圖像的搜索方式快速轉變?yōu)椴榭凑麄€樣本概況的模式。 DIVE 和 STELLARIS 相結合，使您的多光子實驗效率更高。 獲益于在大型復雜樣本中自由導航的功能，通過快速概覽、多位置成像和區(qū)塊掃描獲得深度多色成像。

輕松獲得 1 厘米長、0.5 毫米厚的腎臟切片的拼圖，并全面了解腎神經(jīng)細胞和膠原蛋白系統(tǒng)（此處與 TauContrast 結合使用）。

使用 LAS X Navigator 和 TauContrast 成像的腎臟切片（SunJin Labs，用 RapidClear 透明化）。整個切片尺寸為 10 x 7 mm，厚度為 500 µm。藍色的較短到達時間代表膠原蛋白（SHG 信號），而綠色的較長值代表用 Alexa 633 染色的神經(jīng)細胞。

動態(tài)信號增強：

保持體內(nèi)快速生命過程的分辨率

活體樣本中的生命過程速度可能很快。 然而，動物模型中的熒光信號往往比較弱。

動態(tài)信號增強是應對這兩種挑戰(zhàn)的解決方案。 它可以使信號平均化，實現(xiàn)更佳信噪比，從而獲得更高的分辨率，同時還可適應樣本的動態(tài)變化。